油菜籽叶绿素含量的测定

1.范围

本方法适用于油菜籽中叶绿素含量的测定,不适用于油中叶绿素含量的测定。


2.原理

用特定的溶剂和合适的装置将样品中叶绿素提取出来,在分光光度计上检测叶绿素含量。


3.试剂

试剂除特殊标明外,均为分析纯。

提取溶剂:100mL无水乙醇加入300mL异辛烷(或2,2,5-三甲基戊烷)或戊烷或石油醚(特别是沸点在90℃~100℃之间的7碳化合物)。


4.仪器设备

分光光度计(具有波长扫描功能):波带宽2nm,能测定600nm~700nm波长的吸收值。


5.扦样

扦样时要注意样品的代表性。


6.检测样品的准备

当油菜籽水分含量超过10%(质量分数)时,将油菜籽放在45℃条件下干燥12h,使其水分降到10%(质量分数)或更低,以免损坏叶绿素。

转移50g待测样于机械磨中,磨碎,若使用小型咖啡磨,则每次粉碎10g,然后将几次粉碎的样品充分混合。


7.操作步骤

(1)称样

称取2g(精确到0.001g)样品于提取管中。

(2)提取

①移液管移取30mL提取液到小管或装置中,若使用小管,则加入3个钢球至小管中,振摇提取1h;若为装置中,则需加入4个钢球,提取20min。

②静置10min,然后提取液中速率纸过滤至试管中,迅速盖好试管盖,尽量减少挥发,倒入石英杯中比色。

(3)测定

将提取液倒入石英杯中,分光光度计检测,检测吸收波长:665nm、705nm和625nm(705nm和625nm为校准基线)。


8.结果计算

叶绿素含量W用下式计算:

计算公式

式中:W——叶绿素含量,mg/kg;

K——常数,等于13;

A校正——校正吸收值;

V——加入的提取液体积,mL;

m——称取量,g

L——光程,石英杯的厚度,cm;

A665——665nm处的吸收值;

A705——705nm处的吸收值;

A625——625nm处的吸收值。

若要换算成干基中的叶绿素含量,则应将样品水分含量计算进去,检测方法参考ISO665。


9.精密度

(1)重复性

短期内,同一台仪器、同一个操作者、同一个实验室、同一方法对同一个样品的两次重复的算术平均值应小于10%。

(2)重现性

使用相同的方法,在不同实验室,不同操作者,不同仪器同一样品的两次重复的算术平均值应小于20%。


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